微生物常見檢測方案

     微生物檢測常見的方法有：生長量測定法、微生物計數法、生理指標法和商業(ye) 化快速微生物檢測等，本文列舉(ju) 了一些常用檢測方法的的原理、應用範圍和優(you) 缺點。

      微生物生長意味著原生質含量的增加，所以測定的方法也都直接或間接的以次為(wei) 根據，而測定繁殖則都要建立在計數這一基礎上。微生物生長的衡量，可以從(cong) 其重量，體(ti) 積，密度，濃度，做指標來進行衡量。

一、生長量測定法

1、體(ti) 積測量法：又稱測菌絲(si) 濃度法。

原理：通過測定一定體(ti) 積培養(yang) 液中所含菌絲(si) 的量來反映微生物的生長狀況。菌絲(si) 濃度測定法是大規模工業(ye) 發酵生產(chan) 上微生物生長的一個(ge) 重要監測指標。這種方法比較粗放，簡便，快速，但需要設定一致的處理條件，否則偏差很大，由於(yu) 離心沉澱物中夾雜有一些固體(ti) 營養(yang) 物，結果會(hui) 有一定偏差。

2、稱幹重法：

原理：利用離心或過濾法測定。一般幹重為(wei) 濕重的10-20%。稱幹重發法較為(wei) 煩瑣，通常獲取的微生物產(chan) 品為(wei) 菌體(ti) 時，常采用這種方法，如活性幹酵母（activity  dry  yeast, ADY）,一些以微生物菌體(ti) 為(wei) 活性物質的飼料和肥料。

3、比濁法：

原理：微生物的生長引起培養(yang) 物混濁度的增高。通過紫外分光光度計測定一定波長下的吸光值，判斷微生物的生長狀況。該法主要用於(yu) 發酵工業(ye) 菌體(ti) 生長監測。

4、菌絲(si) 長度測量法：

方法：對於(yu) 絲(si) 狀真菌和一些放線菌，可以在培養(yang) 基上測定一定時間內(nei) 菌絲(si) 生長的長度。

二、微生物計數法

1、血球計數板法:

這種方法簡便，直觀，快捷，但隻適宜於(yu) 單細胞狀態的微生物或絲(si) 狀微生物所產(chan) 生的孢子進行計數，並且所得結果是包括死細胞在內(nei) 的總菌數。

2、染色計數法：

為(wei) 了彌補一些微生物在油鏡下不易觀察計數，而直接用血球計數板法又無法區分死細胞和活細胞的不足，人們(men) 發明了染色計數法。

3、比例計數法：

將已知顆粒（如黴菌孢子或紅細胞）濃度的液體(ti) 與(yu) 一待測細胞濃度的菌液按一定比例均勻混合，在顯微鏡視野中數出各自的數目，即可得未知菌液的細胞濃度。

4、液體(ti) 稀釋法：

對未知菌樣做連續十倍係列稀釋，根據估計數，從(cong) 最適宜的三個(ge) 連續的10倍稀釋液中各取5毫升試樣，接種1毫升到3組共15隻裝培養(yang) 液的試管中，經培養(yang) 後記錄每個(ge) 稀釋度出現生長的試管數，然後查最大或然數表MPN（most probably number）得出菌樣的含菌數，根據樣品稀釋倍數計算出活菌含量。該法常用於(yu) 食品中微生物的檢測，例如飲用水和牛奶的微生物檢查。

5、平板菌落計數法：

這是一種常用的活菌計數法。但方法比較麻煩，操作者需有熟練的技術。平板菌落計數法不僅(jin) 可以得出菌液中活菌的含菌數，而且同時將菌液中的細菌進行了一次分離培養(yang) ，獲得了單克隆。

6、試劑紙法：

在平板計數法的基礎上，發展了小型商品化產(chan) 品以供快速計數用。試劑紙法計數快捷準確，相比而言避免了平板計數法的人為(wei) 操作誤差。

7、膜過濾法：

用特殊的濾膜過濾一定體(ti) 積的含菌樣品，經丫叮橙染色，在紫外顯微鏡下觀察細胞的熒光，活細胞會(hui) 發橙色熒光，而死細胞則發綠色熒光。

三、生理指標法

微生物的生長伴隨著一係列生理指標發生變化，例如酸堿度，發酵液中的含氮量，含糖量，產(chan) 氣量等，與(yu) 生長量相平行的生理指標很多，它們(men) 可作為(wei) 生長測定的相對值。

1、測定含氮量：

大多數細菌的含氮量為(wei) 幹重的12.5%，酵母為(wei) 7.5%，黴菌為(wei) 6.0%。根據含氮量×6.25，即可測定粗蛋白的含量。含氮量的測定方法有很多，如用硫酸，過氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas測氮氣法。

2、測定含碳量：

將少量（幹重0.2-2.0 mg）生物材料混入1毫升水或無機緩衝(chong) 液中，用2毫升2%的K2Cr2O7溶液在100 0C下加熱30分鍾後冷卻。加水稀釋至5毫升，在580nm的波長下讀取吸光光度值，即可推算出生長量。需用試劑做空白對照，用標準樣品做標準曲線。

3、還原糖測定法：

還原糖通常是指單糖或寡糖，可以被微生物直接利用，通過還原糖的測定可間接反映微生物的生長狀況，常用於(yu) 大規模工業(ye) 發酵生產(chan) 上微生物生長的常規監測。

4、氨基氮的測定：

方法是，離心發酵液，取上清液，加入甲基紅和鹽酸作指示劑，加入0.02N的NaOH調色至顏色剛剛褪去，加入底物18%的中性甲醛，反應數刻，加入0.02N的使之變色，根據NaOH的用量折算出氨基氮的含量。根據培養(yang) 液中氨基氮的含量，可間接反映微生物的生長狀況。

5、其他生理物質的測定：

P，DNA，RNA，ATP，NAM（乙酰胞壁酸）等含量以及產(chan) 酸，產(chan) 氣，產(chan) CO2（用標記葡萄糖做基質），耗氧，黏度，產(chan) 熱等指標， 都可用於(yu) 生長量的測定。也可以根據反應前後的基質濃度變化，最終產(chan) 氣量，微生物活性三方麵的測定反映微生物的生長。

四、商業(ye) 化快速微生物檢測法

       微生物的檢測，其發展方向是快速，準確，簡便，自動化，當前很多生物製品公司利用傳(chuan) 統微生物檢測原理，結合不同的檢測方法，設計了形式各異的微生物檢測儀(yi) 器設備，正逐步廣泛應用於(yu) 醫學微生物檢測和科學研究領域。這些儀(yi) 器和設備的生產(chan) 廠家很多，產(chan) 品各異，在此不做一一介紹，具體(ti) 可查看各公司的產(chan) 品說明。