液相色譜使用中樣品預處理需要注意的幾個環節

樣品預處理方法

樣品預處理應包括進樣前的一切操作，除了稱重、溶解、稀釋等步驟外，樣品還需要：

①過濾；

②萃取；

③衍生化(柱前衍生)；

④液相色譜(低壓柱層析)；

這些操作可以是手工進行或實行自動化操作，樣品預處理的目的是除去幹擾物、增加檢測器靈敏度(富集)、保護色譜柱等。樣品預處理同時也是為(wei) 了避免色譜分離故障，其中，樣品萃取是關(guan) 鍵的一步，要從(cong) 大量的幹擾物中萃取出微量組分難度極大。

有些樣品經預處理後還不能作進樣分析，需進行衍生化處理，使一些無紫外吸收或無熒光的組分，經過衍生化後能用紫外和熒光檢測器檢測,這樣既提高了靈敏度，又改善了分離度(質量變化)。樣品預處理的同時也會(hui) 帶來一些問題，如，樣品損失、樣品被汙染、衍生化反映不*或多種反應物生成等。。。衍生反應常會(hui) 影響試驗的精確度，或者在整個(ge) 樣品預處理過程中帶來誤差。

用於(yu) 液相色譜分析的樣品溶液必須均勻而無顆粒，有顆粒會(hui) 損壞進樣器並阻塞柱頭。處理好的樣品在準備上柱前應對準光線搖動，檢查樣品溶液中有無顆粒。隻要看到顆粒、混濁或乳化，就應過濾一下，過濾膜要能截留住0.15μm以上的顆粒，樣品過濾的過程中可能引起：樣品被汙染，因過濾吸附降低樣品組分的含量，樣品溶劑揮發引起誤差。

萃取的目的是從(cong) 共溶的樣品介質中分離出被分析的組分，或者，減少損壞柱的物質(如，蛋白質等)和幹擾物。一般采用有機溶劑萃取，要求萃取用的溶劑毒性低、揮發性好、雜質少、對待測樣品有良好的溶解度且又與(yu) 水不相混溶。

常用的有yi醚、醋酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、苯或者兩(liang) 種以上的混合溶劑。萃取後一般可直接進樣，有時需要濃縮或吹幹濃縮，再用定體(ti) 積的液體(ti) 或流動相溶解進樣。這樣增加了樣品濃度,提高了靈敏度，同時，避免了溶劑峰對樣品峰的幹擾。在萃取是要考慮樣品分子的溶解能力。除了脂溶性和水溶性組分外，還有用脂溶性的組分製成水溶性的鹽，萃取方法如下：

水溶性樣品

（1）酸性組分及生成的鹽萃取方法：

有機溶劑萃取雜質後調成酸性，再加有機溶劑萃取或進樣，或在N2流下吹幹，用適當的溶劑解後進樣。

（2）堿性組分及生成的鹽萃取方法：

有機溶劑萃取雜質後調成堿性，再加有機溶劑萃取或進樣，或在N2流下吹幹，用適當的溶劑溶解後進樣。

（3）中性組分萃取方法：

①有機溶劑萃取雜質後，直接用反相色譜法分析；

②脂溶性組分萃取方法:有機溶劑萃取或進樣，或在N2流下吹幹，用適當的溶劑溶解後進樣；

分析中的汙染

一般檢測的環境、容器、試劑都是影響測定結果的因素。

①環境汙染儀(yi) 器室的有害氣體(ti) 、氣溶液、灰塵等等都能造成汙染，影響檢測結果，這種汙染很難校正。因此，儀(yi) 器室與(yu) 其他實驗室應隔離，保持清潔，儀(yi) 器室內(nei) 應安裝空調，注意：防潮、防腐、防震、空氣相對濕度應小於(yu) 70 %為(wei) 宜。

②容器實驗室常用的器皿有玻璃類、瓷類、石英類、塑料類等，在進行分析時，應按照待則樣品的要求來選則器皿，不管使用哪種器皿，容器的洗條清潔都是很重要的，也是取得好的檢測結果的基本保證。

③試劑在液相色譜分析中，所選用的試劑必須是色譜純、優(you) 級純或分析純，如果，用含量有雜質的試劑，則會(hui) 出現雜峰而影響測定結果。

標準溶液的配置

在配置標準溶液時，先要配置現定濃度的內(nei) 標溶液，在標準溶液和樣品溶液中最好使用同一批次配製的內(nei) 標溶液以減少誤差。

(1)配製標準溶液的物質應當是色譜純的、性質穩定。(2)常用的標準溶液應存放在棕色溶液瓶中低溫保存。(3)在配製維生素類標準品時,要放置在棕色容量瓶中或避光放置以免分解。

樣品預處理過程中的主要故障與(yu) 解決(jue) 辦法

(1)色譜圖中出現無關(guan) 的峰,原因有可能是樣品過濾器帶來汙染,解決(jue) 方法如下:

①將過濾器浸泡在樣品溶劑中並進樣試驗;

②改變過濾器類型;

③采用交替清洗技術；

(2)一些或全部化合物的峰比預期的小，尤其是低濃度的樣品，原因可能是樣品過濾器表麵吸附下降，解決(jue) 方法如下：

①改變過濾器類型；

②嚴(yan) 格按相同條件處理所用樣品；

③采用交替清洗技術。

(3)回收率太低或差，原因可能是，萃取不*，解決(jue) 方法如下：

①增加萃取時間，使用熱溶劑；

②修改清洗方法；

(4)色譜峰變寬,柱壽命縮短,原因可能是樣品帶來的幹擾與(yu) 汙染,應改進清洗方法。

(5)精度差,原因可能是回收不*,解決(jue) 方法如下:

①改進或替換衍生化、分離、萃取或其他條件；

②用自動化處理裝置提高精度；

小結

總之，對分析儀(yi) 器來說，避免故障的最主要的做法是正確的操作和調節，切忌盲目操作，對核心部位如離子室、微電流放大器等減少震動和碰撞，保證絕緣，並減少各種係統誤差要注意以上要點，但，還要注意日常的儀(yi) 器保養(yang) ，色譜柱子的維護，儀(yi) 器室保持清潔，這樣才能使液相色譜處於(yu) 最佳工作狀態，在分析中發揮其重要的作用。